如何建立属于你自己实验室的 OD600–CFU 标准曲线？
发表时间：2025/11/13
如何建立属于你自己实验室的 OD600–CFU 标准曲线？
OD600 只是“浊度”，并不真正等于微生物的细胞数量。若要将 OD 值准确转化为细胞浓度（CFU/mL），必须为每种菌株、每种培养体系建立标准曲线。本文提供可直接使用的标准操作流程（SOP）。
1. 为什么必须建立标准曲线？
原因非常明确：
不同菌株大小不同、散射能力不同；不同仪器光路也不同，导致同样 OD600 的菌液，实际菌浓度可能相差 5–10 倍。
因此，OD600→CFU 的转换必须实验测定，而不能照搬别人数据。
2. 实验材料
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处于对数生长期的菌液（推荐 OD600≈0.5–0.8）
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PBS 或无菌生理盐水
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OD600 测量仪
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平板（LB/YPD 等）
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稀释管
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微量移液器
3. 实验步骤
Step 1：测量原始 OD600
记录 OD_0。
Step 2：连续稀释
做 10⁻¹、10⁻² ... 至 10⁻⁶ 梯度稀释。
Step 3：对每个稀释梯度测量 OD600
记录 OD_i。
Step 4：涂布平板进行计数
每个梯度取 100 μL 涂布。
Step 5：获得菌落数并计算 CFU/mL
CFU/mL=菌落数0.1mL×10稀释倍数CFU/mL=0.1mL菌落数×10稀释倍数Step 6：绘制标准曲线
以 OD600 为横轴，CFU/mL 为纵轴，进行线性拟合。
4. 结果示例
线性关系常见形式：
CFU/mL=(2.3×108)×OD600+1.2×107CFU/mL=(2.3×108)×OD600+1.2×1075. Tips（提升数据质量）
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务必使用同一型号的 OD600 仪器，否则数据不可比
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不同批次培养基的散射可能不同
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避免细胞聚集
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建议每半年复测一次标准曲线
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